Изменение величины изоэлектрической точки формиатдегидрогеназы методом рационального дизайна

Для расширения рН-оптимума стабильности NAD +-зависимой формиатдегидрогеназы (ФДГ, КФ 1. 2. 1. 2) из бактерии Pseudomonas sp 101 (PseФДГ) методом направленного мутагенеза получены четыре мутантных фермента с заменами Lys112Pro, Lys231Ala, Lys231Ser и Lys317Asn. Выбор положений и тип аминокислоты для замены был сделан на основе выравнивания аминокислотных последовательностей ФДГ из разных источников, а также анализа трехмерной структуры PseФДГ. Для всех полученных мутантных форм проведено изучение кинетических свойств и температурной стабильности. Показано, что замены в положениях 112 и 231 приводят к небольшому улучшению кинетических свойств, в то время как для мутанта Lys317Asn наблюдалось снижение сродства к коферменту. Изучение температурной стабильности полученных ферментов показало, что замены в положениях 112 и 231 приводят лишь к небольшой дестабилизации фермента, а замена Lys317Asn вызывает значительную потерю в термостабильности. Для всех полученных мутантных форм наблюдалось снижение изоэлектрической точки примерно на 0, 1 единицу.

• Петров А.С.
• Алексеева А.А.
• Тишков В.И.
• Федорчук В.В.
• Федорчук Е.А.
• Осипова Т.А.

• Прикладные науки. Медицина. Технология

• Естественные науки
• Физико-математические науки