СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ РЕПРОГРАММИРОВАНИЯ ФИБРОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ПОМОЩИ ВИРУСНОЙ ТРАНСДУКЦИИ И ЭПИСОМАЛЬНОЙ ТРАНСФЕКЦИИ
Индуцированные плюрипотентные клетки были получены из фибробластов кожи взрослого человека двумя методами репрограммирования. Эписомальная трансфекция векторами, содержащими последовательность oriP/EBNA-1 для доставки репрограммирующих генов Oct4, Sox2, Klf4, L-Myc и Lin28, оказалась более эффективной по сравнению с вирусной трансдукцией векторами на основе вируса Сендай. В первом случае через 21 сут культивирования насчитывалось порядка 200 колоний на 105 клеток, тогда как во втором — около 8. Колонии полученных двумя методами индуцированных плюрипотентных клеток экспрессировали маркер плюрипотентности Tra1-60.
Авторы
Тэги
Тематические рубрики
Предметные рубрики
В этом же номере:
Резюме по документу**
СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ
РЕПРОГРАММИРОВАНИЯ ФИБРОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА
ПРИ ПОМОЩИ ВИРУСНОЙ ТРАНСДУКЦИИ
И ЭПИСОМАЛЬНОЙ ТРАНСФЕКЦИИ <...> В.Н.Ореховича, Москва, РФ
Индуцированные плюрипотентные клетки были получены из фибробластов кожи взрослого человека двумя метода
ми репрограммирования. <...> Эписомальная трансфекция векторами, содержащими последовательность oriP/EBNA1
для доставки репрограммирующих генов Oct4, Sox2, Klf4, LMyc и Lin28, оказалась более эффективной по сравне
нию с вирусной трансдукцией векторами на основе вируса Сендай. <...> В первом случае через 21 сут культивиро
вания насчитывалось порядка 200 колоний на 105
клеток, тогда как во втором — около 8. <...> Колонии полученных
двумя методами индуцированных плюрипотентных клеток экспрессировали маркер плюрипотентности Tra160. <...> Первая
успешная генерация индуцированных плюрипо
тентных стволовых клеток (иПСК) из соматичес
ких клеток была осуществлена за счет введения
в клетку генов Oct3/4, Sox2, Klf4 и cMyc при по
мощи ретровирусного вектора [6]. <...> В настоящее
время использование ретровирусных векторов,
и в частности лентивирусов, является наиболее
эффективным методом репрограммирования,
поскольку такая система позволяет встраивать
гены непосредственно в геном клетки, способст
вуя тем самым эффективной и стабильной экс
прессии репрограммирующих факторов. <...> Цель данной работы — сравнить эффектив
ность двух методов репрограммирования кож
ных фибробластов: вирусной трансдукции и эпи
сомальной трансфекции при помощи векторов,
не интегрирующихся в геном соматических кле
ток и несущих гены, ответственные за дедиф
ференцировку. <...> Клетки культивировали в полной рос
товой среде DMEM/F12GlutaMax с добавле
нием 10% ЭТС, 100 Ед/мл пенициллина и 100
мкг/мл стрептомицина (все компоненты “Gibco”)
Издательство РАМН, 2015• www.iramn.ru
149
Вдовин А.С., Лупатов А.Ю., Холоденко И.В., Ярыгин К.Н.
в культуральных флаконах 75 см2
CO2инкубаторе (5% CO2
, 37о
(“Greiner”) в
С). <...> Для индукции дифференцировки <...>
** - вычисляется автоматически, возможны погрешности
Похожие документы: