КЛОНИРОВАНИЕ, ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА МЕТАЛЛО-β-ЛАКТАМАЗЫ NDM-1 И ИЗУЧЕНИЕ КАТАЛИТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЕРМЕНТА
Создана система экспрессии гена бета-лактамазы NDM-1 в клетках E. coli, обеспечивающая синтез рекомбинантного белка в растворимой активной форме. Разработан метод выделения и очистки рекомбинантного фермента. Выход гомогенного препарата белка составил 10–15 мг с 1 л культуры клеток. Определены каталитические параметры рекомбинантной бета-лактамазы NDM-1 для субстратов ампициллин (KM = 185 мкM, kкат = 585 с–1) и меропенем (KM = 85 мкM, kкат = 160 с–1), которые согласуются с литературными данными. Впервые определены каталитические параметры для субстрата CENTA (KM = 14 мкM, kкат = 290 с–1).
Авторы
Тэги
Тематические рубрики
Предметные рубрики
В этом же номере:
Резюме по документу**
2
УДК 577.113.6, 577.151.4
КЛОНИРОВАНИЕ, ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА
МЕТАЛЛО-β-ЛАКТАМАЗЫ NDM-1 И ИЗУЧЕНИЕ
КАТАЛИТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНОГО
ФЕРМЕНТА <...> Е.А. Мистрюкова, А.М. Егоров
(кафедра химической энзимологии химического факультета
МГУ имени М.В. Ломоносова; e-mail: vitaly.grigorenko@gmail.com)
(KM = 185 мкM, kкат = 585 с–1) и меропенем (KM = 85 мкM, kкат = 160 с–1), которые согласуются
с литературными данными. <...> Впервые определены каталитические параметры
для субстрата CENTA (KM = 14 мкM, kкат = 290 с–1). <...> Однако эффективность применения бета-лактамных
антибиотиков снижается вследствие возникновения
антибиотикорезистентности (появление
и распространение микроорганизмов, устойчивых
к антибиотикам). <...> Проблема, связанная с устойчивостью
микроорганизмов к бета-лактамным антибиотикам,
является одной из самых актуальных в настоящее
время [2]. <...> Бета-лактамазы представляют собой суперсемейство
генетически и функционально различающихся
ферментов, которые объединяет способность
разрушать бета-лактамное кольцо, в результате
чего антибиотик теряет свою антимикробную
активность. <...> Металло-бета-лактамазы
относятся к классу В и имеют в активном центре
один или два иона цинка, участвующих в катализе. <...> Металло-бета-лактамазы разрушают почти
все группы бета-лактамных антибиотиков, кроме
монобактамов. <...> В активном центре фермента находятся
два атома цинка. <...> Детальное изучение механизмов каталитической
активности бета-лактамазы NDM-1 позволит
получить информацию, необходимую для создания
новых лекарственных средств, эффективных
против устойчивых к бета-лактамным антибиотикам
микроорганизмов. <...> Однако для проведения
такого рода исследований необходимо иметь доСоздана
система экспрессии гена бета-лактамазы NDM-1 в клетках E. coli, обеспечивающая
синтез рекомбинантного белка в растворимой активной форме. <...> Разработан
метод выделения и очистки рекомбинантного фермента. <...> Определены каталитические
параметры рекомбинантной бета-лактамазы NDM-1 для субстратов ампициллин
75 <...>
** - вычисляется автоматически, возможны погрешности
Похожие документы: