ЭКСПРЕССИЯ РЕПОРТНОГО ГЕНА LACZ - ПОКАЗАТЕЛЬ АКТИВАЦИИ ЭМБРИОНАЛЬНОГО ГЕНОМА КРОЛИКОВ

Репортерные гены находят широкое применение во многих областях науки и практики, например, для повышения, эффективности трансгенеза, уменьшения стоимости трансгенных животных, а также в репродуктивной биологии. В настоящее время известно достаточно большое количество репортерных генов, среди которых, наиболее часто используются следующие: люцифераза, хлорамфеникол ацетил трансфераза- САT, пероксидаза и зеленый флуоресцентный белок-GFP. Для идентификации и селекции трансгенных эмбрионов кроликов, а также для выявления инициации экспрессии репортерных генов в эмбриональном геноме в настоящем исследовании были использован репортерный ген LacZ с двумя различными промоторами. Микроинъекцию генных конструкций рCMV-LacZ и pSV-40-LacZ проводили на микроманипуляторе при помощи инвертированного микроскопа “Olympus”. Эти конструкции содержали последовательности гена LacZ, под контролем промотора цитомегаловируса (CMV) или под контролем промотора SV-40. Эмбрионы культивировали в питательной среде Менезо В2, с добавлением 10%-й фетальной сыворотки на протяжении 96 часов в стандартных условиях. Наличие экспрессии гена LacZ эмбрионах определяли гистохимически при помощи окраски X-Gal. В первой серии экспериментов после введения генетической конструкция рCMV-LacZ в пронуклеусы зигот эффективность трансгенеза с экспрессией В-галактозидазы составляла 10,3%. Инициацию экспрессии наблюдали через 24 часа культивирования у 4-бластомерного эмбриона. В менее чем половине трансгенных эмбрионов, наблюдали мозаицизм экспрессии репортерного гена. Во второй серии экспериментов после микроинъекции конструкции pSV-40-LacZ в ранние эмбрионы, их культивировании и проведения гистохимического анализа на наличие В-галактозидазы было показано, эффективность трансгенеза составила 9,5%. Через 24 часа у 4-бластомерного эмбриона была выявлена инициация экспрессии гена LacZ. Таким образом, эффективность трансгенеза незначительно изменилась при использовании двух разных гетерологичных промоторов.

• Козикова Л.В.

• Прикладные науки. Медицина. Технология