НОВЫЕ ГЕНЕТИЧЕСКИЕ КОНСТРУКЦИИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СТАБИЛЬНЫХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИМ ТОКСИНАМ В МЕТИЛОТРОФНЫХ ДРОЖЖАХ PICHIA PASTORIS
Предложен способ получения стабильных Fab-фрагментов антител в дрожжевой системе Pichia pastoris. Ранее были получены Fab-фрагменты антител, способных нейтролизовывать фосфорорганические токсины. Однако высокий уровень протеолитической деградации не позволял получать целевые продукты с высоким выходом. Определение сайтов деградации Fab-фрагментов и установление эндогенных протеаз, осуществляющих деградацию, позволило получить оптимизированные генетические конструкции для экспрессии тяжелой цепи антител (IgG1) и легких цепей как каппа, так и лямбда изотипа. При совместной котрансформации векторов были получены Fab-фрагменты антител к фосфорорганическим токсинам без протеолитической деградации конечного препарата.
Авторы
Тэги
Тематические рубрики
Предметные рубрики
В этом же номере:
Резюме по документу**
96
Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2016, Том 161, 1
НОВЫЕ ГЕНЕТИЧЕСКИЕ КОНСТРУКЦИИ ДЛЯ
ПОЛУЧЕНИЯ СТАБИЛЬНЫХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ
АНТИТЕЛ К ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИМ ТОКСИНАМ
В МЕТИЛОТРОФНЫХ ДРОЖЖАХ PICHIA PASTORIS <...> М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Москва, РФ
Предложен способ получения стабильных Fabфрагментов антител в дрожжевой систе
ме Pichia pastoris. <...> Ранее были получены Fabфрагменты антител, способных нейтролизо
вывать фосфорорганические токсины. <...> Определение
сайтов деградации Fabфрагментов и установление эндогенных протеаз, осуществляющих
деградацию, позволило получить оптимизированные генетические конструкции для экс
прессии тяжелой цепи антител (IgG1) и легких цепей как каппа, так и лямбда изотипа. <...> При совместной котрансформации векторов были получены Fabфрагменты антител к
фосфорорганическим токсинам без протеолитической деградации конечного препарата. <...> Ключевые слова: каталитические антитела, фосфорорганические соединения, Fab
фрагменты антител, система экспрессии в Pichia pastoris, выделение рекомбинантных белков
Антитела являются одним из основных компо
нентов адаптивного иммунитета. <...> Таким об
разом, использование каталитических антител
Адрес для корреспонденции: smirnov@mx.ibch.ru. <...> Для отобранных антител, в частности
А5 и А17, было установлено, что ковалентной мо
дификации подвергаются разные аминокислотные
остатки: для антитела А17 — остаток Y37 легкой
цепи, а для антитела А5 — Y33 легкой цепи, что
свидетельствует о принципиально разных меха
низмах действия рассматриваемых абзимов [4]. <...> Для сравнения механизмов катализа изучаемых
антител и получения их вариантов с улучшенны
ми кинетическими параметрами в количествах,
ГЕНЕТИКА
необходимых для проведения структурнофунк
циональных исследований и дальнейшего био
фармацевтического производства, мы разрабо
тали технологию получения антител в виде Fab
фрагментов в дрожжевой системе Pichia pastoris <...> Были получены штаммыпродуценты <...>
** - вычисляется автоматически, возможны погрешности
Похожие документы: