РУАЭСТ (RUAEST)
ОПТИМАЛЬНЫЕ УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ СПЕРМАТОЗОИДОВ ДЛЯ АНАЛИЗА ФРАГМЕНТАЦИИ ДНК
Исследование уровня фрагментации ДНК сперматозоидов методом проточной цитометрии для оценки мужской фертильности все чаще начинает применяться в клинической диагностике, однако создание оптимального протокола хранения и подготовки сперматозоидов для анализа до сих пор находится на стадии экспериментальной разработки. Цель исследования – изучить влияние различных условий подготовки эякулята для адекватной оценки индекса фрагментации ДНК (ИФД) сперматозоидов методом SCSA (sperm chromatin structure assay). У 20 пациентов Красноярского центра репродуктивной медицины оценивали ИФД методом SCSA в свежем нативном эякуляте и после хранения сперматозоидов при различной температуре (37, 25, 4 oC) и длительности (1–2 и 1–3 сут) и условий хранения (при -20 или -70 oC) замороженных сперматозоидов (в виде нативного эякулята или в TNE-буфере), Показано, что ИФД существенно не меняется в эякуляте, хранившемся при 4 oC в течение 48 ч. При хранении эякулята при (25 или 37 oC ИФД значительно увеличивается уже после 1-х суток, а инкубация эякулята при 37 oC приводит к повышению ИФД уже после 1-го часа. Выявлены индивидуальные различия по степени увеличения ИФД под воздействием изучаемых температур инкубации эякулята. Хранение сперматозоидов при температуре 20 или 70oC в нативном эякуляте либо в TNE-буфере не влияло на ИФД при измерении в течении 1–2 ч. Таким образом, хранение и транспортировка нативного эякулята при 4oC в течение от 1 до 2 сут или в замороженном виде при температуре -20 или -70 oC могут быть рекомендованы для адекватной оценки уровня фрагментации ДНК сперматозоидов.