Количественная иммунофлуоресцентная оценка с использованием проточной цитофлуориметрии экспрессии эстрогеновых рецепторов beta в солидных опухолях человека

Проведена адаптация условий имунофлуоресцентного анализа эстрогеновых рецепторов (ЭР ) с использованием проточной цитофлуориметрии (ПЦФ) и моноклональных антител к ЭР фирмы "Abсam" (клон 14С8), специфических по отношению к N-терминальному домену белка ЭР человека. Показана возможность фиксации клеток 4%-м раствором формальдегида и варьирования числа клеток в суспензии, что позволяет исследовать не только образцы опухоли, получаемые во время хирургических операций, но и при эндоскопическом обследовании больных и биопсии опухоли. К использованию в клинической практике рекомендована продолжительность инкубации с первичными антителами в течение ночи (15-20 ч. ), а с вторичными - 1, 5 ч, что оправдано с точки зрения большей чувствительности метода, сокращения расхода антител и удобства для персонала. Для контроля активности антител в качестве референсной культуры рекомендованы клетки рака молочной железы линии MCF-7 и диапазон концентраций антител 0, 06; 1, 2 и 2, 5 мкг/мл. Для количественной оценки частоты экспрессии ЭР в солидных опухолях человека обосновано использование антител в области концентраций 1, 2; 2, 5 и 5 мкг/мл, которая включает область линейной зависимости флуоресцентного специфического окрашивания от концентраций антител и область достижения окрашивания всех клеток в исследуемой клеточной суспензии, а следовательно, и в исследуемой опухоли.

• Прикладные науки. Медицина. Технология

• Естественные науки
• Физико-математические науки