ВЛИЯНИЕ ЗАМЕНЫ ОСТАТКОВ Met НА ОСТАТОК Leu НА КАТАЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА, ОКИСЛИТЕЛЬНУЮ И ТЕМПЕРАТУРНУЮ СТАБИЛЬНОСТЬ ОКСИДАЗЫ D-АМИНОКИСЛОТ ДРОЖЖЕЙ
Окислительная стабильность ферментов определяется в первую очередь остатками Cys и Met. В случае оксидазы D-аминокислот (DAAO, КФ 1.4.3.3) из дрожжей Trigonopsis variabilis (TvDAAO) методом направленного мутагенеза получены три мутеина с точечными заменами остатка Met на остаток Leu. Выбор положений для введения замены сделан на основе множественного выравнивания аминокислотных последовательностей DAAO из разных источников, а также анализа трехмерной структуры TvDAAO. Для полученных мутантов изучены каталитические свойства, а также температурная и окислительная стабильность. Во всех случаях замена привела к изменению у мутантных ферментов профиля субстратной специфичности. Наблюдается заметное увеличение констант Михаэлиса для небольших субстратов и уменьшению КМ для D-аминокислот с объемным боковым радикалом. Показано, что в результате одной из замен происходит повышение температурной стабильности TvDAAO в 2–3 раза по сравнению с ферментом дикого типа. Разработана методика определения стабильности TvDAAO к действию пероксида водорода. Изучена окислительная стабильность фермента дикого типа и полученных мутантных TvDAAO. Установлено, что во всех случаях замена остатка Met на остаток Leu незначительно повлияла на окислительную стабильность фермента.
Авторы
Тэги
Тематические рубрики
Предметные рубрики
В этом же номере:
Резюме по документу**
4
УДК 577.15.1
ВЛИЯНИЕ ЗАМЕНЫ ОСТАТКОВ Met НА ОСТАТОК Leu
НА КАТАЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА,
ОКИСЛИТЕЛЬНУЮ И ТЕМПЕРАТУРНУЮ
СТАБИЛЬНОСТЬ ОКСИДАЗЫ D-АМИНОКИСЛОТ
ДРОЖЖЕЙ
Д.Л. <...> А.Н. Баха, Федеральный исследовательский центр «Фундаментальные
основы биотехнологии» РАН; *e-mail: vitishkov@gmail.com)
Окислительная стабильность ферментов определяется в первую очередь остатками
Cys и Met. <...> В случае оксидазы D-аминокислот (DAAO, КФ 1.4.3.3) из дрожжей
Trigonopsis variabilis (TvDAAO) методом направленного мутагенеза получены три
мутеина с точечными заменами остатка Met на остаток Leu. <...> Выбор положений для
введения замены сделан на основе множественного выравнивания аминокислотных
последовательностей DAAO из разных источников, а также анализа трехмерной
структуры TvDAAO. <...> Для полученных мутантов изучены каталитические свойства,
а также температурная и окислительная стабильность. <...> Во всех случаях замена привела
к изменению у мутантных ферментов профиля субстратной специфичности. <...> Показано, что
в результате одной из замен происходит повышение температурной стабильности
TvDAAO в 2–3 раза по сравнению с ферментом дикого типа. <...> Разработана методика
определения стабильности TvDAAO к действию пероксида водорода. <...> Изучена окислительная
стабильность фермента дикого типа и полученных мутантных TvDAAO. <...> Ключевые слова: оксидаза D-аминокилот, Trigonopsis variabilis, направленный
мутагенез, окислительная стабильность, каталитические свойства, температурная
стабильность. <...> Для DAAO
одним из процессов, определяющих ее операционную
стабильность, является окисление амино253
254
кислотных остатков ферментов под действием
пероксида водорода, который образуется в результате
реакции, катализируемой этим ферментом
[13–15]. <...> Цель данной работы – изучение стабильности
TvDAAO к действию пероксида водорода и исследование
влияния замен Met/Leu в положениях 104,
156 и 209 на каталитические свойства, а также температурную
и химическую стабильность фермента. <...> Получение штаммов E. coli – продуцентов
мутантных TvDAAO и фермента <...>
** - вычисляется автоматически, возможны погрешности
Похожие документы: